液相色譜儀用途及原理
更新時(shí)間：2018-04-20 點(diǎn)擊次數：6862
液相色譜儀主要有進(jìn)樣系統、輸液系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統，下面將分別敘述其各自的組成與特點(diǎn)?！ ?br /> 1.進(jìn)樣系統一般采用隔膜注射進(jìn)樣器或高壓進(jìn)樣間完成進(jìn)樣操作，進(jìn)樣量是恒定的。這對提高分析樣品的重復性是有益的?！ ?br /> 2.輸液系統該系統包括高壓泵、流動(dòng)相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強為l.47～4.4X107Pa，流速可調且穩定，當高壓流動(dòng)相通過(guò)層析柱時(shí)，可降低樣品在柱中的擴散效應，可加快其在柱中的移動(dòng)速度，這對提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。流動(dòng)相貯存錯和梯度儀，可使流動(dòng)相隨固定相和樣品的性質(zhì)而改變，包括改變洗脫液的極性、離子強度、PH值，或改用競爭性抑制劑或變性劑等。這就可使各種物質(zhì)(即使僅有一個(gè)基團的差別或是同分異構體)都能獲得有效分離?！ ?br /> 3.分離系統該系統包括色譜柱、連接管和恒溫器等。色譜柱一般長(cháng)度為10～50cm(需要兩根連用時(shí)，可在二者之間加一連接管)，內徑為2～5mm，由"不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成，住內裝有直徑為5～10μm粒度的固定相(由基質(zhì)和固定液構成).固定相中的基質(zhì)是由機械強度高的樹(shù)脂或硅膠構成，它們都有惰性(如硅膠表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性(孔徑可達1000?)和比表面積大的特點(diǎn)，加之其表面經(jīng)過(guò)機械涂漬(與氣相色譜中固定相的制備一樣)，或者用化學(xué)法偶聯(lián)各種基因(如磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長(cháng)度碳鏈的烷基等)或配體的有機化合物。因此，這類(lèi)固定相對結構不同的物質(zhì)有良好的選擇性。例如，在多孔性硅膠表面偶聯(lián)豌豆凝集素(PSA)后，就可以把成纖維細胞中的一種糖蛋白分離出來(lái)?！ ×硗?，固定相基質(zhì)粒小，柱床極易達到均勻、致密狀態(tài)，極易降低渦流擴散效應?；|(zhì)粒度小，微孔淺，樣品在微孔區內傳質(zhì)短。這些對縮小譜帶寬度、提高分辨率是有益的。根據柱效理論分析，基質(zhì)粒度小，塔板理論數N就越大。這也進(jìn)一步證明基質(zhì)粒度小，會(huì )提高分辨率的道理。再者，液相色譜的恒溫器可使溫度從室溫調到60C，通過(guò)改善傳質(zhì)速度，縮短分析時(shí)間，就可增加層析柱的效率?！ ?br /> 4.檢測系統液相色譜常用的檢測器有紫外檢測器、示差折光檢測器和熒光檢測器三種?！ ?br /> (1)紫外檢測器該檢測器適用于對紫外光(或可見(jiàn)光)有吸收性能樣品的檢測。其特點(diǎn)：使用面廣(如蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用);靈敏度高(檢測下限為10-10g/ml);線(xiàn)性范圍寬;對溫度和流速變化不敏感;可檢測梯度溶液洗脫的樣品?！ ?br /> (2)示差折光檢測器凡具有與流動(dòng)相折光率不同的樣品組分，均可使用示差折光檢測器檢測。目前，糖類(lèi)化合物的檢測大多使用此檢測系統。這一系統通用性強、操作簡(jiǎn)單，但靈敏度低(檢測下限為10-7g/ml)，流動(dòng)相的變化會(huì )引起折光率的變化，因此，它既不適用于痕量分析，也不適用于梯度洗脫樣品的檢測?！ ?br /> (3)熒光檢測器凡具有熒光的物質(zhì)，在一定條件下，其發(fā)射光的熒光強度與物質(zhì)的濃度成正比。因此，這一檢測器只適用于具有熒光的有機化合物(如多環(huán)芳烴、氨基酸、胺類(lèi)、維生素和某些蛋白質(zhì)等)的測定，其靈敏度很高(檢測下限為10-12～10-14g/ml)，痕量分析和梯度洗脫作品的檢測均可采用?！ ?br /> 5.數據處理系統該系統可對測試數據進(jìn)行采集、貯存、顯示、打印和處理等操作，使樣品的分離、制備或鑒定工作能正確開(kāi)展。
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